地址:中国江苏南京永智路6号中国云计算基地B座F06
电话:17768119489
邮箱:2216681997@QQ.Com
网址:http://www.eternal-fei.com/
时间:2020-08-27 17:37:22 浏览次数:0次
产品描述:
本品用DMSO溶解,因为DMSO熔点是18.3℃,使用前请放置到室温充分溶解。
产品特点:
1、无毒性:花菁染料,无致癌性。
2、高敏性:紫外凝胶透射仪观测灵敏度盖于EB染色法5-20倍,用可见光透射仪比紫外光条件下的灵敏度比EB染色法高20-30倍。
3、信噪比高:样品荧光信号强,无背景信号。
4、操作简单:无须脱色或冲洗,即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察
5、使用范围广:可适用于多种电泳分析,如琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
6、使用方便:不影响其他修饰酶左右(如:Taq 酶、内切酶、T4连接酶、反转录酶等)。
7、经济:价格比银染便宜(例如:1ml稀释10倍,即使10000ul可以使用10000次)。
使用方法:
一、胶染法(用法通EB)( 推荐方法,见图1)
1、制胶时加入SYBR Green I 核酸染料。冷却胶到 50℃左右,每 100ml 胶中加入1-3µl SYBR Green I 核酸染料(见图 1)。
2、按照常规方法进行电泳即可。
3、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶,每块胶点50个样,可做50000次。
二、点染法(见图3)
1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I 稀释100倍,即为SYBR Green I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。
3、制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4、样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR Green I 与样品中DNA充分结合。SYBR Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
5、DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μL SYBR Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I 与DNA充分结合。
6、上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 即可,可以使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。
三、泡染法
1、按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。
2、用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀释SYBR Green I 核酸染料,混匀,制成染色溶液。
3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用泡染方法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但是三种方法中染料用量最大的。
几种染色方法特点比较:
特点 染色方法 |
灵敏度 |
染料用量 |
确定片段分子量精确度 |
胶染法 |
较高 |
较少 |
较高 |
点染法 |
很高 |
最少 |
大片段稍有滞后 |
泡染法 |
较高 |
最多 |
最高 |
点染+胶染法 |
最高 |
较多 |
大片段稍有滞后 |
注意事项:
1、Sybr Green核酸染料样品点染方法中,电泳不要超过2小时,以免核酸染料从 DNA/RNA上分离出来,产生弥散状条带。
2、用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。
3、常规用酒精沉淀核酸过程中,SYBR Green I 核酸染料可以全部从核酸上去掉。
4、DNA电泳请选择SYBRGreenI染料,RNA电泳请选择SYBRGreenII染料,两种染
料不通用。
5、SYBR Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
保存方法:
2-8℃避光干燥保存,有效期24个月。